Вы здесь

Главная

Зависимость чувствительности метода комета-тест от условий электрофореза

ID_Статьи: 
55.00

Разработка новых высокочувствительных методик для исследования генотоксического действия различных физико-химических факторов является актуальной задачей. Целью настоящей работы было повышение чувствительности метода комета-тест путем оптимизации условий проведения электрофореза. Эксперименты выполнены на лимфоцитах крови мышей аутбредного стока NMRI. Чтобы исключить влияние ферментов репарации, облучению подвергались клетки, прошедшие стадию лизиса, то есть нуклеоиды лимфоцитов (дозы 0, 2 и 5 Гр, гамма-излучение 60Со, ГУБЭ). Электрофорез нуклеоидов проводили в течение 20 мин при +4°С при различных напряженностях электрического поля: 1.0 (стандартные условия), 1.2, 1.5 и 2.0 В/см. Сопоставление результатов, полученных при использовании стандартной и повышенных напряженности электрического поля в ходе щелочного комета-теста, показало, что в контрольных препаратах (0 Гр) с увеличением напряженности электрического поля от 1 до 2 В/см наблюдалось увеличение процентного содержания ДНК в хвосте кометы в 2 раза. При дозе ионизирующего излучения 2 Гр с увеличением напряженности электрического поля процентное содержание ДНК в хвосте кометы увеличивалось в 3 раза и при 5 Гр - в 3.5 раза. Таким образом, с увеличением напряженности электрического поля при электрофорезе чувствительность метода существенно повышается. Мы полагаем, что отмеченный эффект обусловлен не только увеличением напряженности электрического поля, но и ростом температуры электрофоретического буфера во время электрофореза.

 

Туртикова О.В.1, Гудкова О.Ю.2, Гапеев А.Б.2, Сирота Н.П.3

1Пущинский государственный университет, Пущино (Россия)

2Институт биофизики клетки РАН, Пущино (Россия)

3Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН, Пущино (Россия)