Вы здесь

Главная

Взаимодейстие изолированной б-субъединицы РНК-полимеразы Е. coli с промоторной ДНК

ID_Статьи: 
133.00

Взаимодействие ферментов транскрипции с регуляторными участками ге­номов является строго регулируемым этапом в экспрессии генетической ин­формации. В бактериальных клетках в этом принимают участие по крайней мере три субъединицы РНК-полимеразы (а и 2 идентичные а), которые узнают канонические (одинаковые для всех промоторов) и неканонические, варьирую­щие элементы ДНК, соответственно. Молекулярный механизм взаимодействия s С каноническими элементами относительно хорошо изучен. Наша работа по­священа исследованию контактов, формируемых с промотором а-субъедини-цей. Для этого методом футпринтинга ДНКазой 1 были изучены Комплексы образуемые нативной изолированной а-субъединицей и ее мутантной произ­водной (Е286А), измененной в Т7D-ДНК-связывающем сайте, с рядом модель­ных матриц: промоторами rrnBPl и T7D, имеющими разные последовательности оснований в месте взаимодействия с а; с гибридной матрицей DR, содержащей контактирующий с а модуль T7D и узнаваемую а часть rrnBPl; с промоторами (RC и DT), содержащими точечные замены, приближающие последовательности нуклеотидов rrnBPl и T7D друг к другу. Показано:

- изолированные а-субъедииицы способны связываться с rrnBPl, T7D и DR, узнавая на них те же участки что и в составе полного фермента;

- точечные замены: АТТТТ-АСТТТ в rrnBPl и АСТТГ-АТТТТ в T7D, влияя на топологию комплексов, не препятствуют взаимодействию;

- модификация белка увеличивает размер его контакта с T7D и DT.

Полученные данные свидетельствует о селективности контактов, формируе­мых с промоторной ДНК a-субьединицами и о зависимости способа этого вза­имодействия от структуры контактирующих поверхностей.

 

Пуртов Ю.А., Масулис И.В., Часов В.В., Озолинь О.Н.

Институт биофизики клетки РАН, Пущино