Вы здесь

Главная

Выявление значимых для резонансного переноса энергии биолюминесценции эпитопов GFP

ID_Статьи: 
68.00

Белки из биолюминесцентной системы морского кишечнополостного Aequoria victoria - акворин и зелёный флуоресцентный белок (GFP) способны к резонансному переносу энергии биолюминесценции (BRET). Ранее нами было показано, что поликлональные антитела против GFP прерывают BRET в гибридных белках GFP-акворин. Свойство гибридов изменять спектр своей биолюминесценции при связывании с другими белками, представляется интересным для разработки и создания новых систем иммуноферментного анализа. Для исследования молекулярных основ BRET важно выяснить является ли ингибирование BRET результатом связывания антител с какими-то определенными участками гибрида, или же любое связывание с поверхностью GFP будет приводить к ингибированию переноса энергии.

Данная работа посвещена выявлению в структуре зелёного флуоресцентного белка участков, при взаимодействии с которыми антител, наблюдается прерывание BRET.

Для получения моно специфичных антител к разным участкам GFP, были использованы различные пептиды этого белка, полученные химическим и ферментативным гидролизом. После иммобилизации этих пептидов на BrCN-сефарозе и истощения на колонках с полученным носителем сыворотки с антителами против GFP были получены моноспецифичные антитела к различным аминокислотным последовательностям GFP.

Показано, что прерывание BRET в гибридном белке EGFP-Aeq возможно с помощью антител к линейным детерминантам, а значимой для BRET областью в зелёном флуоресцентном белке является последовательность - Pro 90 - Met 219.

Полученные результаты являются основой для создания систем гомогенного иммуноферментного анализа.

 

Кулесский Е.А., Аржанов М.А., Руденко Н.В., Гороховатский А.Ю., Винокуров Л.М.

Филиал Института Биоорганической химии им. ак. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова. Лаборатория организации

белковых структур, г. Пущино (Россия).