Вы здесь

Главная

Выявление белков, связывающих промотор L1 крысы

ID_Статьи: 
88.00

Огромную часть геномов млекопитающих (42 % у человека) составляют ретротранспозоны, однако функции этих элементов до сих пор остаются мало изученными. Наиболее распространены ретротранспозоны семейства L1. Первым этапом ретротранспозиции элементов L1 является их транскрипция. Транскрипция L1 детектируется лишь на определенных стадиях развития мужских и женских половых клеток и в некоторых опухолях. Последовательности, расположенные в 5'-нетранслируемых районах L1, могут выполнять функцию промотора. До сих пор не выявлены факторы, способные обеспечить специфический паттерн экспрессии L1. Целью настоящего исследования был поиск ядерных белков, специфически связывающихся с промоторным районом L1 крысы. Конкретными задачами работы являлось: клонировать промоторный район L1 крысы, исследовать наличие предполагаемых регуляторных элементов в составе этого района, выявить и охарактеризовать ядерные промотор-связывающие белки. В результате исследования был клонирован фрагмент промоторной области L1 крысы PRLP (408 п.н.). Компьютерными методами во фрагменте PRLP обнаружены сайты связывания для транскрипционных факторов API, Spl, ССААТ-связывающего белка. В ядерном экстракте из клеток семенников методом ретардации выявлен фактор, специфически связывающий последовательность PRLP. С помощью саузвестерн-блоттинга молекулярная масса мажорного PRLP-связывающего белка оценена как 105 кДа (р105). Показано, что связывание фактора р105 с ДНК является цинк зависимым. На основании полученных результатов можно сделать следующие выводы: белок р 105 специфически связывается с промотором L1 крысы и претендует на роль активатора транскрипции; совпадение молекулярных масс, наличие в составе PRLP соответствующего сайта и зависимость связывания от цинка позволяет предположить, что р 105 может оказаться известным транскрипционным фактором Spl.

 

Федоров А.В., Подгорная О.И.

Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург (Россия)