Вы здесь

Главная

Выделение и очистка изоцитратлиазы из куколок бабочки P. machaon

ID_Статьи: 
86.00

Вопрос о функционировании глиоксилатного цикла в тканях животных (в том числе и у насекомых) до сих пор является дискуссионным. Значение жиров в обмене веществ насекомых исключительно велико, так как они служат одним из основных источников получения энергии во время линек, при метаморфозе, при имагинальной афагии и в периоды голодания. Известно, что ГЦ является одним из метаболических путей, обеспечивающих конверсию жирных кислот в углеводы, т.е. глюконеогенез. Целью нашей работы был поиск ключевого фермента ГЦ изоцитратлиазы (ИЦЛ) в куколке бабочки P.machaon L. Удалось идентифицировать ИЦЛ с удельной активностью 5,3 ФЕ/мг бежа. В результате разработанной нами схемы выделения и очистки, включающей высаливание (35-65% насыщения сульфата аммония), ионообменную хроматографию на ДЭАЭ-фрактогеле и гель-фильтрацию на сефадексах G-25 и G-200, был получен высокоочищенный ферментативный препарат со степенью очистки 98 раз и выходом 6%. Км по изоцитрату составила 1,5 мМ, рН 7,5, молекулярная масса 140+2 кДа. Проведено специфическое проявление ИЦЛ с помощью метода, который предполагает локализацию ферментативной активности непосредственно в полиакриламидном геле. Методика основана на способности глиоксилата образовывать с модифицированным реагентом Шиффа сильно окрашенное соединение. С помощью данного метода было показано наличие одной белковой полосы с электрофоретической подвижностью 0,18.

Таким образом, впервые выделен и получен в высоко очищенном состоянии ИЦЛ из куколок P.machaon, что является одним из доказательств ведущей роли ГЦ в глюконеогенезе насекомых на различных стадиях онтогенеза.

 

Шевченко М.Ю., Москалев Е.А., Епринцев A.T.

Воронежский государственный университет, Воронеж (Россия).