Вы здесь

Главная

Выделение и изучение свойств термостабильного белка мозга - фактора ингибирования миграции макрофагов

ID_Статьи: 
83.00

Работа направлена на исследование молекулярных механизмов действия шаперонов по защите белков от агрегации, вызываемой различными денатурирующими воздействиями и выявление низкомолекулярных гидрофобных шалероноподобных бежов и пептидов. В качестве объекта исследования выбран цитокин - фактор ингибирования миграции макрофагов (macrophage migration inhibitory factor, MIF). Был разработан простой оригинальный метод выделения MIF из мозга быка в гомогенном состоянии, включающий нагревание гомогената (58°С, 20 мин.), высаливание, гель-фильтрацию и ионо-обменную хроматографию. Метод выделения MIF предполагал также обратно-фазовую ВЭЖХ, с использованием градиента: 0,1% ТФУ - ацетонитрил (0-70%, 70 мин). Для идентификации выделенных фракций после высушивания на SpeedVac они были подвергнуты электрофорезу в ПААГ в присутствии SDS и микросеквенированию N-концевой последовательности. В результате были выявлены изоформы MIF, N-концевые последовательности которых оказались идентичными. На основании масс-спектрального анализа были получены значения молекулярных масс исследуемых белков (12369.21; 12299.7; 9496.2 и 29568.9 Да). С использованием гидроксифенилпирувата в качестве субстрата обнаружена ферментативная (таутомеразная) активность гомотримера MIF. Методом изоэлектрического фокусирования показано наличие двух изоформ, характеризующихся значениями р! 6,9 и 7,0. Полученные результаты свидетельствуют о том, что MEF обладает уникальной стабильностью, он сохраняет цельность своей первичной структуры при высокой температуре, низких значениях рН, выдерживает воздействия солей в больших концентрациях и агрессивных химических агентов. Его участие в биохимических механизмах формирования защитных реакций организма и адаптации к повреждающим воздействиям самой различной природы может быть использовано, главным образом, в биотехнологии, фармакологии и медицине.

 

Черепкова О.А., Гурвиц Б.Я.

Институт биохимии им. А.Н. Баха РАН, Москва (Россия)