Вы здесь

Главная

Выделение агробактериального vire2-белка, образующего комплекс с SS-ДНК

ID_Статьи: 
45.00

Бактерии рода Agrobacierium, являются природными векторами и вызывают образование у двудольных растений опухоли путем переноса однонитчатой Т-ДНК в комплексе с белками VirE2 и VirD2 и встраивания в хромосому хозяина. Целью данного исследования было выделение УггЕ2-белка для последующего исследования его роли в переносе Т-ДНК через мембрану и цитоплазму эукариотической клетки.

Для наработки VirЕ2-белка проведено клонирование гена virE2 в плазм иду pQESl. Для клонирования этого гена из суммарной ДНК агробактерий штаммов С58, F17 были использованы праймеры: VirE2 (+):5 '-GAC-GAT-GGA-TCC-GAA-GGC-CGA-AG -3' VirE2(-):5'-AAAA-CTG-CAG-CTA-CAG-ACT-GTT-TAC-GGT-TGG-GCC-GC-3'. УпЕ2-белок выделяли из 200-500 мл ночной культуры штамма XL 1-blue E.coli, содержащего плазмиду pQESl- virE2 и индуцированной IPTG. После разрушения клеток ультразвуком надосадок, содержащий VirE2x6His, очищали методом аффинной хроматографии на М-NTA агарозной колонке. Очищенный препарат анализировали на наличие VirE2-белка методом иммуноблоттинга после SDS-ПААГ-электрофореза с помощью меченых мини-антител, полученных на VirE2-белок. Проверку VirE2-белка взаимодействовать с однонитчатой ДНК проверяли по формированию комплексов, регистрируемых с помощью ПААГ-электрофореза. Таким образом, выделен, очищен и частично охарактеризован препарат VirE2-белка, образующего Т-комплекс с ss-ДНК.

 

Сазонова И.А., Волохина И.В., Рожок Н.А., Беликов В.А., Чумаков М.И.

Институт биохимии и физиологии растений и микроорганизмов РАН, Саратов