Вы здесь

Главная

Влияние взаимодействий между аминокислотными остатками 43 и 61 на термостабильность бактериальных формиатдегидрогеназ

ID_Статьи: 
96.00

Для улучшения кинетических свойств и стабильности NAD+-зависимой формиатдегидрогеназы (КФ 1.2.1.2., ФДГ) из метилотрофных бактерий Pseudomonas sp. 101 (РзеФДГ) необходимо изучение механизма термостабильности данного фермента. Ранее было показано, что РsеФДГ отличается от формиатдегидрогеназы из Mycobacterium vaccae N10 (МусФДГ) всего двумя аминокислотами из 400 - Ilе35 и Glu61 в МусФДГ вместо Thr35 и Lys61 в РзеФДГ. Однако константа скорости термоинактивации МусФДГ при температурах 54-65° (активность фермента измерялась спектрофотометрически) в 4-6 раз больше, чем соответствующая константа фермента из Pseudomonas sp. 101. Для изучения роли этих остатков в стабильности ФДГ была изучена зависимость наблюдаемой константы скорости инактивации от концентрации фосфата и определены кинетические и термодинамические параметры процесса термоинактивации как рекомбинантных ферментов дикого типа, так и мутантных: МусФДГ Glu61Gln, Glu61Pro, Glu61Lys и РsеФДГ Lys61Arg, полученных методом сайт-направленного мутагенеза. Показано, что более низкая стабильность МусФДГ по сравнению с РsеФДГ в основном обусловлена электростатическим отталкиванием между остатками Asp43 и Glu61. Замена остатка Lys на остаток Arg в молекуле РsеФДГ не приводит к повышению стабильности этого фермента.

 

Ясный И.Е., Федорчук В.В.

Кафедра химической энзимологии Химического факультета МГУ им. М.В.Ломоносова