Вы здесь

Главная

Влияние нарушений транспорта белков в вакуоль на секрецию урокиназы человека клетками дрожжей Hansenula polymorphа

ID_Статьи: 
66.00

Низкая эффективность секреции некоторых рекомбинантных белков клетками дрожжей связана с тем, что они направляются на деградацию в вакуоль посредством VpslOp рецептора. Это могло быть причиной плохой секреции урокиназы человека, поскольку мутация в гене PMR1 у дрожжей одновременно улучшает секрецию этого белка и нарушает Vps Юр-зависимый транспорт белков в вакуоль. Задача данного исследования состояла в том, чтобы проверить, влияет ли нарушение вакуолярного сортинга на эффективность секреции урокиназы.

В штамме дрожжей Hansenula polymorpha был нарушен ген VPS10, который содержал кассету экспрессии урокиназы. Эта мутация привела к увеличению активности урокиназы в культуральной среде. Однако анализ культуральных сред методом иммуноблоттинга показал, что мутация почти не влияет на количество белка, но изменяет его свойства. Урокиназа синтезируется в виде предшественника, который переходит в активную форму в результате протеолитического процессинга. Оказалось, что штамм дикого типа секретировал преимущественно непро-цессированную форму, в то время как штамм с нарушенным геном VPS10 секретировал только процессированный белок. Нами был проведен поиск мутантов Н. polymorpha с увеличенной способностью секретировать активную урокиназу. Идентификация мутантных локусов в этих штаммах показала, что к аналогичным эффектам может г.эиводить нарушение и других генов, ответственных за направление белков в вакуоль, например VPS8, VPS17 и РЕРЗ.

Таким образом, было показано, что нарушение вакуолярного сортинга и, как следствие, нарушение вакуолярной деградации чужеродных белков не влияет на эффективность секреции урокиназы клетками дрожжей.

 

Романова Н.В.

Московский физико-технический институт, Долгопрудный (Россия)