Вы здесь

Главная

Влияние ионов Mg2+ на стабильность нуклеозид-дифосфат киназы из археона Natrialba magadii

ID_Статьи: 
127.00

Галоалкалофильный археон Natrialba magadii обитает в среде с концент­рацией NaCl 3,5 М, рН 9,5. Выделенная из него ранее нуклеозид-дифосфат (НДФ) киназа (гомоолигомерный гексамер с молекулярным весом субъедйницы 23000) отличается от большинства галофильных белков способностью функциониро­вать в широком диапазоне ионной силы. Функциональная активность киназы требует присутствия ионов магния.

В настоящей работе было исследовано влияние ионов Mg2+ на стабиль­ность НДФ киназы. Согласно данным ограниченного протеолиза, НДФ киназа устойчива к действию трипсина при снижении концентрации NaCl до 450 мМ. Однако уже 0,5 мМ MgCl2 было достаточно для стабилизации белка. В обоих случаях дальнейшее уменьшение концентрации соли приводило к расщепле­нию белка с образованием фрагмента около 10 кДа. Согласно данным тель-фильтрации, образующийся триптический фрагмент существует в виде гекса-мера, то есть при трипсинолизе не затрагивается зона межсубъединичных кон­тактов. Калориметрические эксперименты показали, что в нормальных соле­вых условиях (3,5 М NaCl) ионы Mg2+ в исследуемых концентрациях не оказы­вают влияния на стабильность киназы. Денатурация была обратима, при плавле­нии не происходило диссоциации, следовательно, зона межсубъединичных кон­тактов не разрушалась. Температура плавления киназы в буфере с 5мМ MgCl2 без NaCl снижалась до 4ГС. В случае отсутствия; NaCl и MgCl2 в буфере пик не регистрировался, то есть эта часть белка, в отсутствии MgCl2 денатурирует уже при комнатной температуре. Это также подтвердилось результатами протеоли-за: киназа в буфере с 5мМ концентрацией MgCl2 при нагревании до 4ГС рас­щеплялась с образованием того же фрагмента, что и белок в отсутствии MgCl2 при комнатной температуре. Стабилизация ионами Mg2+ четвертичной струк­туры киназы также была подтверждена данными гель-фильтрации при воздей­ствии денатурантов.

 

Полосина Я.Ю., Охрименко O.A., Замяткин Д.Ф.

Институт белка, РАН, Пущино