Вы здесь

Главная

Влияние экзогеной обработки 6-бензиламинопурином на степень метилирования цитозиновых оснований межгенного спейсера рДНК Triticum urartu

ID_Статьи: 
42.00

В связи с тем, что рибосомные РНК играют важную роль в жизни клетки, изучение регуляции транскрипции генов рРНК представляет большой интерес. Одним из способов регуляции транскрипции, как при участий Pol I, так и Pol II, является метилирование цитозина по пятому атому углерода. Была выявлена взаимосвязь между уровнем метилирования и активностью генов рРНК: более высокая степень метилирования ДНК соответствует более низкому уровню транскрипции генов, находящихся в этом участке. Метилирование цитозина у растений происходит по сайтам CG и CNG, хотя в последнее время в некоторых работах упоминается о неспецифических сайтах метилирования цитозина.

Известно, что обработка растений БАЛ, который относится к растительным гормонам цитокининам, ведет к увеличению транскрипции генов рРНК. Для выяснения механизмов увеличения транскрипции под действием Б ATI, растения Triticum urartu обрабатывались гормоном в концентрациях 10*10-6 М, также брался контроль без обработок.

Из образцов выделялась тотальная ДНК, которая обрабатывалась метабисульфитом натрия, что приводит к превращению неметилированного цитозина в урацил, а при последующей амплификации в тимин. После таких обработок ДНК подвергалась амплификации с праймерами, один из которых отжигался в области МГС, а другой ожигался уже в (+) области, принадлежащей так называемой зоне пре рРНК. Полученные амплификаты разделяли электрофорезом для выявления полиморфизма однонитчатых участков путем SSCP-анализа. Были выявлены полосы присущие, как только, растениям Triticum urartu обработанным гормоном в концентрациях 10-5, и Ю-6 М, так и общие для контроля и опыта.

Выявленные полосы были элюированны, реамплифицированны и клонированы. После чего клоны секвенировали. Нуклеотидные последовательности были проанализированы, выявлено восемнадцать сайтов в которых цитозин не метилирован, причем десять из восемнадцати сайтов выявлены только у растений обработанных БАП.

Из этих данных можно сделать вывод, что фитогормоны растений, в частности цитокинины, могут влиять на уровень метилирования цитозинов. Также можно предположить, что изменению статуса метилирования цитозинов является одним из молекулярных механизмов влияния цитокининов на уровень транскрипции генов.

 

Сабиржанов Б.Е.

Институт биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН, Уфа (Россия)