Вы здесь

Главная

Влияние дисбаланса фосфолипидного состава, вызванного инактивацией гена pgsA на экспрессию, секрецию и репрессию щелочной фосфатазы

ID_Статьи: 
9.00

Известно, что анионные фосфолипиды являются важнейшим компонентом секреторного аппарата клетки. В настоящей работе было изучено влияние инактивации гена pgsA, ответственного за синтез анионного фосфолипида -фосфатидилглицерина (ФГ), на экспрессию, секрецию и репрессию синтеза щелочной фосфатазы (PhoA) Escherichia coli. Главная стратегия для достижения поставленной цели заключалась в использовании штаммов Е. coli HD30 и HL30, в которых ген pgsA, чувствительный к температуре, клонирован в плазмиду pHD102. Клетки этих штаммов, не содержащих плазмиду pHD102, не жизнеспособны. Анализ фосфолипидного состава изученных штамма Е. coli показал, что содержание ФГ зависит как от температуры культивирования, так и от природы штамма, снижаясь при 42°С в штамме HD30 в 5 раз, а в штамме HL30 - в 2 раза. Значительное снижение ФГ сопровождается снижением эффективности секреции щелочной фосфатазы, которую оценивали по активности фермента, приобретаемой после его транслокации через цитоплазматическую мембрану в периплазму, а также по динамике превращения импульсно меченого предшественника щелочной фосфатазы в зрелую форму фермента. Более того, с помощью иммуноблотинга и включения метаболического предшественника РЖ -[14С]-урацила в тотальную РНК при существенном уменьшении содержания ФГ выявлено снижение уровня экспрессии PhoA. Показано также, что при инактивации гена pgsA независимо от уровня снижения фосфатидилглицерина репрессия синтеза PhoA наступает сразу после добавления ортофосфата в среду. Результаты свидетельствуют о вкладе в экспрессию и секрецию содержания именно фосфатидилглицерина, а не анионных фосфолипидов в целом.

 

Анисимова Е.В.1, Головастое В.В.2, Несмеянова М.А.2

1 Пущинский государственный университет, Пущино (Россия)

2 Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им Г.К. Скрябина РАН, Пущино (Россия)