Вы здесь

Главная

Влияние амплификации генов proBA и (proBA, GdhA) на распределение потока углерода в центральном метаболизме клеток Е. coli K12

ID_Статьи: 
74.00

В штамм Е. coli К12 W3110 дикого типа введены рекомбинантные плазмиды, сконструированные на основе мало-копийного вектора с хорошо известным репликоном pSClOl (pMW119). Одна из этих плазмид, pMWproBA, содержала фрагмент хромосомы Ecoli с опероном proBA, ответственным за биосинтез пролина, а вторая, pMWproBAgdhA, имела в своем составе, дополнительно к proBA, также ген gdhA. В результате амплификации указанных генов активность соответствующих ферментов в рекомбинантных клетках значительно возросла: в частности, активность GdhA за счет введения плазмиды pMWproBAgdhA увеличилась в 10 раз по сравнению с бесплазмидными клетками.

Функционирование белковых продуктов амплифицированных генов привело также и к существенному перераспределению потока углерода в центральном метаболизме, что было зарегистрировано при анализе гидролизатов белков клеток, выращенных на среде с [С13]-глюкозой, методом двумерной ЯМР-спектроскопии. В плазмидных клетках увеличен (примерно на 20%) поток углерода через окислительную ветвь пентозо-фосфатного пути и вдвое снижен внутриклеточный пул С1-соединений по сравнению с контрольным штаммом дикого типа. Зарегистрировано также значительное уменьшение потока углерода через цикл трикарбоновых кислот: на 30% в случае амплификации ргоВА и на 50% при совместной амплификации proBA и gdhA.

Есть основания предполагать, что зарегистрированные перераспределения потоков углерода в центральном метаболизме отражают реально произошедшие изменения энергетического и материального баланса в клетках с амплифицированными генами биосинтеза пролина или, дополнительно, глутамат дегидрогеназы.

 

Фомина С.А., Киверо А.Д., Беневоленский М.С.

ЗАО «НИИ Аджиномото-Генетика», г.Москва