Вы здесь

Главная

Влияние актиномицина д на биосинтез внеклеточной рибонуклеазы В. amyloliquefaciens – барназы

ID_Статьи: 
89.00

Многие виды бацилл секретируют гуанилспецифичные внеклеточные рибонуклеазы. Известно, что биосинтез РНКазы В. intermedins биназы I и РНКазы В. pumilus Bp регулируется по типу генов РНО-регулона В. subtilis, подавляется неорганическим фосфатом (Фн) и стимулируется ингибитором транскрипции актиномицином Д (АД). Однако накопление РНКазы В. amyloliquefaciens барназы от Фн не зависит. При этом секреция барназы происходит посттрансляционно и менее эффективно, чем у ряда других секретируемых ферментов бацилл.

Установлено влияние АД на синтез барназы в условиях различного содержания Фн в среде в рекомбинантном штамме В. subtilis JH642 с плазмидой рМТ420 (ген барназы). АД подавляет рост рекомбинантного штамма В. subtilis рМТ420 на обеих средах, но оказывает различный эффект на образование барназы в зависимости от содержания Фн. В контрольной среде биосинтез барназы подавляются по мере увеличения концентрации антибиотика. В среде богатой Фн (100мкг/мл) удельная активность барназы при концентрации АД 0,35 мкг/мл возрастает в 2 раза. Для установления вклада промотора и лидерной последовательности (ЛП) в регуляцию экспрессии гена барназы были использованы рекомбинантные плазмиды, в которых промотор барназы состыкован с кодирующей областью РНКазы Bp (pMZ62) и биназы (pMZ60), а также плазмида pMZ61, в которой ЛП РНКазы Bp заменена ЛП барназы. Внесение АД повышает биосинтез биназы и барназы с промотора барназы в 1,5 - 2,0 раза, однако стимулирующий эффект антибиотика снимается в среде с Фн. Этот факт позволяет предположить, что механизмы регуляции экспрессии гена барназы на уровне транскрипции сходны с таковыми остальных гуанилспецифичных РНКаз. Однако биосинтез РНКазы Bp с лидерным пептидом барназы не стимулируется АД в низкофосфорной среде. В богатой Фн среде наблюдается резкое падение общей и удельной активности фермента.

 

Каюмов А.Р., Знаменская Л.В.

Казанский государственный университет, Казань (Россия)