Вы здесь

Главная

Увеличение выхода рекомбинантного Fab-фрагмента антитела против 2,4-дихлорофенокси-уксусной кислоты

ID_Статьи: 
73.00

Настоящая работа посвящена повышению выхода рекомбинантного фраг­мента антитела с применением методов белковой инженерии в сочетании с молекулярным моделированием структуры.

Ген антитела Е2/В5 против 2,4-дихлорофенокси-уксусной кислоты был ра­нее секвенирован и клонирован в вектор pASK84 (Dr. К. Schmengler, ICB, Munster, Германия). Выход рекомбинантного белка составил 30-50 мкг/л культуры Е. coli, что существенно ниже описанного в литературе выхода для этой плазмиды.

Так как класс антител высококонсервативен, для остатков р-каркаса доме­нов антитела существует консенсусная последовательность. В большинстве случаев, существенные отклонения от данной последовательности приводят к понижению выхода данного антитела при бактериальной экспрессии. В первую очередь, это касается отклонений, приводящих к появлению полярных остатков в гидрофобном ядре доменов и гидрофобных остатков на поверхности белка. Структура вариабельных доменов данного антитела была смоделирована нами ранее. На основе анализа структуры в сравнении с литературными дан­ными методом сайт-направленного мутагенеза был получен ряд мутантНых ва­риантов данного антитела. Для них показана аддитивность влияния мутаций, что согласуется с литературными данными.

Среди полученных вариантов наилучший выход при сохранении исходного сродства к антигену имеет белок с тройной мутацией AlaL5Thr/ArgL6Gln/LeuL102Thr. Его выход превышает выход исходного белка в среднем на 80%, и составляет 70-100 мкг/л культуры Е. coll.

 

 

Колясников О. В., Григоренко В.Г.

Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, Москва