Вы здесь

Главная

Трехмерная структура и механизм действия терморезистентной трегалозо-6-фосфат гидролазы из Bacillus sp. gp16

ID_Статьи: 
87.00

Трегалоза (б-О-глюкопиранозил-б-D-глюкопиранозид) является невосстанавливающим дисахаридом. присутствующим в самых разнообразных организмах, включая бактерии, грибы, растения и млекопитающих. Трегалозу находят в спорах, покоящихся клетках и в клетках, подвергающихся различным формам стресса. Это связано с тем, что этот сахар обладает уникальной способностью поддерживать нативное состояние мембран в условиях обезвоживания, повышенной температуры, высокой ионной силы. С другой стороны, многие организмы могут использовать трегалозу как экзогенный источник углерода.

Цель настоящей работы - определить основные биохимические характеристики трегалозо-6-фосфат гидролазы, установить трехмерную структуру фермента и структуру его комплекса с ингибитором 1 -дезоксинойиримицином. Эти данные позволят сделать обоснованные выводы по механизму катализа. Следует отметить, что биохимически это весьма мало изученный фермент, и в литературе приводятся противоречивые кинетические данные.

Ген трегалозо-6-фосфат гидролазы был нами клонирован и секвенирован. Em размер составил 1692 пары оснований, что соответствует белку длиной 564 аминокислоты и мол. веса 66270 Да. Были определены основные биохимические характеристики фермента - сняты зависимости Vm и Km от рН, получены температурные зависимости констант, исследована зависимость активности от ионной силы. Были подобраны условия кристаллизации фермента и уже получены первые монокристаллы размером 0,2-0,3 мм, правда пока в виде сросшихся розеток.

Механизм действия б-глюкозидаз в настоящее время хорошо установлен, и трегалозо-6-фосфат гидролаза, несмотря на нестандартный тип глюкозидной связи, по всей видимости работает в рамках этой модели.

 

Карелов Д.В., Фирсов Л.М.

Петербургский институт ядерной физики, РАН, Санкт-Петербург (Россия)