Вы здесь

Главная

Термостабильность свободной и иммобилизованной глюкоамилазы от концентрации ионов водорода

ID_Статьи: 
142.00

В водных средах денатурирующее воздействие температуры и рН среды настолько тесно связаны, что их действие зачастую рассматривается как совме­стное. При интерпретации процессов денатурации следует учитывать следую­щие факты. Белок является полиамфолитом, имеющим, благодаря ассоциации и диссоциации протонов, множество ионных форм, активности этих форм связа­ны друг с другом уравнением закона действия масс, включающим [Н+]; изме­нение степени связывания протонов сопровождается изменением стабильнос­ти молекул, что отражается на скорости денатурации.

Термоинактивацию растворов глюкоамилазы и образцов, иммобилизован­ного сорбционным методом, фермента проводили термостатированием при тем­пературе 65°С в ацетатном буфере при разных значениях рН. Через определен­ные промежутки времени измеряли остаточную активность при насыщающей концентрации субстрата глюкозооксидазным методом.

Проведенные исследования показали, что во всем изученном интервале рН (3,0-6,4) при температуре 65°С наблюдается необратимая термоинактивация глюкоамилазы. Кинетика данного процесса хорошо; описывается уравнением первого порядка, что позволяет рассчитать эффективные константы скорости инактивации.

Интервал рН стабильности для иммобилизованного фермента несколько расширяется по сравнению со свободным. При отклонении рН от оптимально­го значения (рН 4,7-5,0) происходит увеличение константы инактивации, при­чем для свободного фермента - более резкое. Это связано с тем, что в резуль­тате иммобилизации фермент попадает в новую среду, в которой концентра­ция ионов водорода может отличаться от концентрации ионов в растворе. Поэтому чувствительность иммобилизованной глюкоамилазы к изменению рН меньше, чем у нативного фермента, и среда носителя обладает фактически буферными свойствами.

 

Руадзе И.Л.1, Слепокурова Ю.И.1, Щкутина И.В.2

1 Воронежская государственная технологическая академия, Воронеж

2 Воронежский государственный университет, Воронеж