Вы здесь

Главная

Субтилизины Bacillus intermedius 3-19 поздней стационарной фазы роста

ID_Статьи: 
78.00

Известно, что бациллы в поздней стационарной фазе роста секретируют щелочные и нейтральные протеиназы, которые выполняют ряд важных функций в процессе клеточной дифференцировки, в частности, в процессе спорообразования. Изучение энзиматических свойств и субстратной специфичности протеиназ, секретируемых на поздних стадиях спорообразования, позволит подойти к решению вопроса о функциональной роли этих ферментов у бацилл. Работа посвящена изучению протеолитических ферментов поздней стационарной фазы роста Bacillus intermedius 3-19. В культуральной жидкости Bacillus intermedius обнаружены сериновые протеиназы с максимальной активностью на 44 час роста. С помощью репортерного маркера для цитоплазматических белков b-галактозидазы установлено, что протеиназы не накапливаются в результате лизиса клеток, а секретируются в среду. Для получения гомогенных ферментов использовали ионообменную хроматографию на КМ-целлюлозе и высокоэффективную жидкостную хроматографию (FPLC). Получены белковые фракции, которые по действию на специфические хромогенные субстраты, типу ингибирования и субстратной специфичности идентифицированы как субтилизины (две фракции). Рехроматография на колонке MonoS позволила получить электрофоретически гомогенные препараты белков. С помощью электрофореза в ПААГ с SDS определены молекулярные массы протеиназ. Субтилизин 1 имеет молекулярную массу 26 kDa, субтилизин 2-28 kDa. Определены каталитические константы белков (Кm и kcat). рН-оптимум субтилизина 2 равен 9,0, оптимум температуры - 55°С. Ионы Са2+ приводят к увеличению активности фермента на 30%. Термостабильность фермента сохраняется в интервале температур 37-50°С в присутствии ионов Са2+, и в отсутствии ионов Са2+ активность фермента резко уменьшается. Аминокислотный состав субтилизина 2 поздней стационарной фазы роста имеет некоторые отличия от аминокислотного состава субтилизина, секретируемого в ранней стационарной фазе роста, тогда как N-концевые последовательности из 10 аминокислот соответствующих протеиназ идентичны.

 

Соколова Е.А., Марданова A.M., Балабан Н.П.

Казанский государственный университет, Казань (Россия)