Вы здесь

Главная

Сравнительный анализ возможности выявления стволовых клеток in vitro и in situ

ID_Статьи: 
84.00

За последние время широкое распространение получили методы маркировки и выделения стволовых клеток с помощью клеточной сортировки. Один из них основан на способности этих клеток выбрасывать проникающие в них красители, в том числе и флуоресцентный краситель Хехст33342. Целью данного исследования являлась попытка выявления стволовых клеток in situ методами флуоресцентной микроскопии.

При анализе базального слоя эпидермиса человека, культивированного in vitro, было показано, что клетки, прижизненно выбрасывающие Хехст, экспрессировали и белок p63, традиционно используемый как маркер стволовых клеток в этой системе. Данные, полученные методом проточной цитофлуорометрии, говорят о том, что доля Хехст(-) клеток составляет приблизительно 0,2%. При этом клеток p63(+) оказалось больше. Картина мечения p63 in situ (на тотальном эпидермисе человека) значительно отличалась: практически все клетки базального и супрабазального слоя были p63(+) вне зависимости от мечения Хехстом.

Для выявления транзиторных клеток эпидермиса in situ использовались антитела против PCNA - циклина, экспрессирующегося в течение всего митотического цикла (поздняя G1 - митоз). PCNA(-) клетки всегда были Хехст(-).

Таким образом, Хехст(-) клетки оказались PCNA(-), то есть клетками, находящимися в пролиферативном покое, что является неотъемлемой чертой стволовых клеток в самообновляющихся тканевых системах. В тоже время, экспрессия p63 оказалась не всегда связанной с феноменом выброса Хехста как in situ, так и in vitro, что, по нашему мнению, говорит об ограниченности использования p63 как маркера стволовых клеток эпидермиса.

 

Цитрин Е. Б.

Институт биологии развития им. Н. К. Кольцова РАН, Москва (Россия)