Вы здесь

Главная

Сравнительное изучение стабильности DsRed и EGFP

ID_Статьи: 
79.00

Зеленый флуоресцентный белок (EGFP) из Aequorea victoria и красный флуоресцентный белок DsRed из кораллов Discosoma широко используются в качестве маркеров при изучении генной экспрессии, локализации и динамики белков, в клетке. При использовании флуоресцентных белков (FP) в качестве маркеров большое значение имеет их стабильность. Целью данной работы стало сравнительное изучение устойчивости EGFP и DsRed к денатурирующему воздействию гуанидингидрохлорида (GdnHCl).

Обнаружено значительное различие устойчивости EGFP и DsRed к воздействию GdnHCl. Время, за которое интенсивность флуоресценции EGFP уменьшается на 50%, составляет 11.2, 4.96 и 1.29 минут для 4.0, 5.6, и 6.2 М GdnHCl, соответственно. В тоже время, через 20 часов инкубации DsRed в присутствии 6.2 М GdnHCl интенсивность флуоресценции белка уменьшается лишь на 11%. Анализ стационарных зависимостей интенсивности флуоресценции от концентрации GdnHCl, измеренных через 5, 15, 50, 70 и 200 часов инкубации в присутствии денатуранта, показал, что величина С1/2 (концентрация GdnHCl, при которой интенсивность флуоресценции уменьшается на 50%) составляет 4.6 М для DsRed и 2.4 М для EGFP, причем время достижения равновесия для DsRed в 2 раза больше, чем для EGFP.

Все экспериментальные данные свидетельствуют о том, что DsRed обладает существенно большей стабильностью по сравнению с EGFP. Известно, что третичная структура DsRed и EGFP одинакова и представляет собой (3-barrel. Предполагается, что основным фактором, определяющим различную стабильность этих белков, является то обстоятельство, что EGFP является мономером, в то время как DsRed - тетрамером. Планируется проверить этот вывод путем сравнительного изучения стабильности мутантных форм этих белков: zFP506 (тетрамер зеленого FP), mRFPl (мономер красного FP) и «dimer2» (димер красного FP).

 

Степаненко О.В.1, Верхуша В.В.2, Туроверов К.К1.

1Институт Цитологии РАН, Санкт-Петербург (Россия)

2Университет Колорадо, Денвер (США)