Вы здесь

Главная

Сравнение биохимических свойств нативной эндонуклеазы рестрикции ECO 29KI и ее 6-НIS-производной

ID_Статьи: 
104.00

Сайт-специфические эндонуклеазы и соответствующие им ДНК-метилт-рансферазы, входящие в состав систем рестрикции-модификации II типа, благо­даря высокой специфичности (известно более 210 различных сайтов на ДНК), широко используются в генной инженерии, биотехнологии и структурных ис­следований ДНК. Эти ферменты являются также привлекательной моделью для изучения ДНК-белковых и белок-белковых взаимодействий, благодаря широ­кому разнообразию узнаваемой последовательности ДНК, высокой специфично­сти и тому обстоятельству, что для многих ферментов уже известна аминокис­лотная последовательность и пространственная структура.

Ранее в нашей лаборатории в клиническом изоляте Escherichia coli 29k была идентифицирована плазмида рЕС029, кодирующая систему рестрикции-модификации II типа Eсо29КI, определена первичная нуклеотидная последова­тельность генов, кодирующих данную систему. Данная работа посвящена выде­лению и изучению биохимических свойств эндонуклеазы рестрикции £со29К1, а также оценке влияния, которое оказывает 6-His таг на ферментативные свой­ства фермента.

Нами был проведен анализ активности Eсо29КI и 6-His-£co29KI в зависи­мости от концентрации NaCl, KCI; рН и температуры. Оказалось, что максималь­ная активность Eсо29КI наблюдается в области 50 мМ NaCl, 50 мМ КС1, рН 7,0-8,5 и 37°С. А для 6-Ш-производной - 100-150 мМ NaCl, 25-75 мМ КС1, рН 7,5-8,0 и 30-37°С. Таким образом, 6-His-Tar способствует сдвигу оптимума фермента­тивной реакции рестрикции в более высокую ионную силу, низкую температу­ру и щелочные значения рН.

 

Мокришева М.Л., Никитин Д.В., Солонин А.С.

Институт биохимии и физиологии РАН им. Г.К. Скрябина, Пущино