Вы здесь

Главная

Создание новых генетических конструкций для получения одноцепочечных антител к TNFa человека в Е. coli

ID_Статьи: 
29.00

Фактор некроза опухолей альфа (TNFa) - один из цитокинов, обусловливающий ряд негативных явлений при повышении его концентрации в крови. Для предотвращения негативного воздействия повышенных концентраций TNFa в крови можно использовать соответствующие одноцепочечные антитела, то есть белок, содержащий в составе одной цепи последовательности вариабельных участков легкой (L) и тяжелой (Н) цепей соответствующих моноклональных антител. Ранее в лаборатории химии генов ИБХ РАН были получены несколько конструкций, позволяющих получать белковый продукт в том числе и в растворимой форме (белок на основе конструкции 6His-H-L).

В дальнейшем были разработаны и оптимизитрованы методы выделения и очистки. Однако исследования с помощью иммунологических методов (Elisa) показали отсутствие биоспецифичности полученных антител, вероятно, в результате экранирования гексагистидиновыми остатками N-концевой части молекулы. В связи с этим были созданы новые конструкции: L-H в плазмиде pET23d, содержащая вариабельные последовательности легкой и тяжелой цепей, соединенные линкером, и аналогичная конструкция L-H-6His, которая отличается от предыдущей наличием последовательности, соответствующей тандему из шести гистидинов на С-конце бежа.

Обе конструкции экпрессировали белок в нерастворимом виде. Белок 1-h очищали методом ионообменной хроматографии, a l-h-6his - металлоаффинной. Затем продукты экспрессии переводили в растворимое состояние методом ступенчатого диализа. Белок 1-h связывался с антигеном TNF6, хотя степень связывания была ниже, чем в случае нативных моноклональных антител. Свойства белка l-h-6His исследуются.

 

Полыхалова И.В., Шингарова Л.Н,

Институт биоорганической химии им.М.М. Шемякина и ЮА. Овчинникова РАН, Москва