Вы здесь

Главная

Создание искусственных генов для получения одноцепочечных антител к TNFa человека в Е. coli

ID_Статьи: 
128.00

Фактор некроза опухоли альфа (TNFa) человека - белок, относящийся к груп­пе цитокинов, и являющийся необходимым элементом иммунного ответа. Син­тез TNFa стимулируется, в частности, появлением в крови липополисахарида грамртрицательных бактерий. Повышение концентрации TNFa в крови приводит к ряду нежелательных и опасных для жизни человека последствий вплоть до септического шока. Кроме того, с этим цитокином связано возникновение не­которых аутоиммунных заболеваний. Для предотвращения нежелательных по­следствий повышения концентрации TNFa в крови можно использовать соот­ветствующие антитела. F10 - высокоаффинное мышиное моноклональное ан­титело (МАТ) к TNFa, представляющее собой иммуноглобулин класа IgG2 с аффинностью связывания 2*1010 М-1

Ранее в лаборатории химии генов ИБХ были клонированы гены тяжелой и легкой цепей MAT F10 и определена их первичная структура. Данная работа посвящена конструированию искусственных генов, кодирующих одноцепочеч-ные антитела для последующей экспрессии в Е. coli. Сначала в плазмиде рЕТ20b(+) была создана генетическая конструкция pelB-LcFv-iinker-HcFv, содер­жащая вариабельные фрагменты тяжелой (HcFv) и легкой (LcFv) цепей анти­тел F10 к TNFa человека, соединенные линкером (GGGGSGGGGSGGGGS). PelB - последовательность лидерного пептида, способствующего выносу белка в пе-риплазматическое пространство. Затем была получена конструкция pelB-HcFv-linker- LcFv. Третья конструкция (6His- HcFv-linker- LcFv) содержала на 5'-конце последовательность, кодирующую подряд шесть гистидинов для облегчения очи­стки, и не имела лидерной последовательности.

Экспрессия во всех трех случаях наблюдалась в штамме Е. coli AD494DE3. Причем первые две генетические конструкции приводили к накоплению белка в тельцах включения, в то время как прямая экспрессия гена без лидерной последовательности, но с. шестью гистидинами на N-конце обеспечивала эффек­тивный биосинтез растворимого белка. В настоящее время разрабатываются методы очистки и выделения.

 

Полыхалова И.В., Коробко В.Г., Щингарова Л.Н.

Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Москва