Вы здесь

Главная

Создание генно-инженерных конструкций, содержащих ген нуклеокапсидного белка вируса ГЛПС и исследование его экспрессии в трансгенных растениях

ID_Статьи: 
141.00

Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС) — широко рас­пространенное в странах Евразии вирусное заболевание зоонозной природы. В России один из крупнейших природных очагов ГЛПС находится на территории Республики Башкортостан и географически связан с ареалом распространения переносчика вируса, рыжей полевки Cletrionomys glareolus. Начиная с 1957 года, в Башкирии ежегодно фиксируется 2000-2600 случаев заболевания ГЛПС, вы­зываемые хантавирусом серотипа Puumala.

Целью нашей работы является создание генно-инженерных конструкций гена нуклеокапсидного N-белка с различными регуляторными элементами на основе S-сегмента вирусного генома, кодирующего этот белок, обеспечивающих экспрессию белка вируса ГЛПС в трансгенных растениях, и исследование его иммуногенных свойств. Для клонирования гена нуклеокапсидного белка были взяты изоляты хантавируса, выделенные из больных, погибших вследствие забо­левания ГЛПС во время вспышки 1997-1998 гг. в Уфе. Амплифицированный фрагмент этого гена был клонирован в бактериальных векторах pGemT-Easy и pCR II под контролем 1ас-промотора.

Следующим этапом нашей работы было создание плазмидной конструкции, пригодной для экспрессии N-белка как в бактериальных, так и в растительных системах. Для этого фрагмент гена нуклеокапсидного белка был переклониро­ван в ряд бинарных векторов под контролем промотора 35S. Далее было прове­дено рестриктазное картирование и секвенирование полученных клонов; были отобраны конструкции, содержащие ген S-сегмента в нужной ориентации по отношению к 35S промотору. В настоящее время ведется работа по переносу гена S-сегмента в агробактерии.

 

Романенкова М.Л., Чубукова О.В.

Институт биохимии и генетики УНЦ РАН, Уфа