Вы здесь

Главная

Синтез и физико-химические свойства конъюгата олигонуклеотида с церамидом

ID_Статьи: 
38.00

Одной из проблем применения антисмысловых олигонуклеотидов (ОН) как терапевтических препаратов является их плохое проникновение внутрь клеток. Во многих работах уже предложены варианты решения этой проблемы при помощи различных химических модификаций, например получение гибридных молекул путем присоединения к ОН гидрофобных остатков холестерина, витамина Е, различных алкильных групп и т.п.

Целью нашей работы был синтез конъюгата ОН с церамидом - природным липидом, входящим в состав клеточных мембран. Амидная группа церамида стабильна при действии реагентов, применяемых в олигонуклеотидном синтезе, и может быть использована для введения флуоресцентной метки при изучении проникновения ОН в клетку. Наличие двух гидроксильных групп позволяет вводить гидрофобный фрагмент в середину олигонуклеотидной цепи.

На первом этапе нами был осуществлен синтез модельного ОН, содержащего на 5'-конце остаток церамида. Синтез проводили стандартным фосфорамидитным твердофазным методом. Липидную часть присоединяли на последней стадии, используя Я-фосфонатный метод. Полученный конъюгат выделяли при помощи обращенно-фазовой ВЭХЖ. Молекулярная масса конъюгата была подтверждена при помощи МАЛДИ масс-спектрометрии. Таким же образом был получен конъюгат тиоолигонуклеотида с церамидом. Олигонуклеотиды были охарактеризованы по подвижности на гель-электрофорезе в денатурирующих условиях. Были определены термодинамические параметры образования дуплексов с комплементарными последовательностями. При плавлении дуплексов, одна из цепей которого представляет конъюгат олигонуклеотида с церамидом, наблюдалось два температурных перехода.

 

Ходаков Д.А.1, Козлова А.Ю.1, Есипов Д.С.1, Стрелецкий А.В.1, Осколкова О.В.2

1МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва (Россия)

2Технический Университет, Институт биохимии, Грац (Австрия)