Вы здесь

Главная

рН-зависимость термостабильности нативной и мутантной формиатдегидрогеназ

ID_Статьи: 
21.00

Формиатдегидрогеназа (ФДГ) катализирует реакцию окисления формиат-иона до углекислого газа при сопряжённом восстановлении NAD+ до NADH и интересна тем, является наилучшим для систем регенерации NADH, который используется в качестве кофактора сотнями дегидрогеназ. Превосходство ФДГ над другими ферментами при использовании в системе регенерации NADH обусловлено необратимостью катализируемой реакции, широким рН-оптимумом, строгой специфичностью фермента, а также дешевизной второго субстрата - формиата. Важную роль при использовании ФДГ в промышленности играет её термостабильность, так как очистка фермента проводится при высоких температурах. Наиболее высокой стабильностью и удельной активностью обладает ФДГ из метилотрофных бактерий Pseudomonas sp. 101. Ген этого фермента был клонирован и экспрессирован в клетках Е. coli, благодаря чему рекомбинантный фермент превзошёл по своим кинетическим характеристикам нативную ФДГ.

Целью данной работы являлось изучение рН-зависимости термостабильности двух образцов ФДГ: ФДГ дикого типа и термостабильного мутанта Т7 (содержащего 7 аминокислотных замен, повышающих термостабильность) с целью изучения электростатических взаимодействий и определения значений рН, допускающих применение фермента. Показано, что введение мутаций, повышающих гидрофобность фермента, приводит и к более широкому рН-оптимуму стабильности мутантной ФДГ.

 

Петров А.С., Попова А.С., Ясный И.Е.

Кафедра химической энзимологии Химического факультета МГУ им. М.В.Ломоносова