Вы здесь

Главная

Рибосомные белки L10 и L7/L12 из архей: суперэкспрессия генов, получение РНК-белковых и белок-белковых комплексов и их кристаллизация

ID_Статьи: 
48.00

Несмотря на успех в определении кристаллической структуры рибосом остается ряд функционально важных участков рибосомы, которые слишком ра-зупорядочены в составе рибосомных субчастиц и из-за этого не видны на кар­тах электронной плотности. Среди этих участков рибосомы с неизвестной структурой наиболее интересным представляется пентамерный комплекс L10*(L7/L12)4 и особенно в соединении со специфическим участком рРНК. В данной работе мы впервые клонировали и экспрессировали гены рибосомных белков L10 и L7/L12 из гипертермофильных архей Methanococcus jannaschii, М. thermolithotrophicus и М. igneus, выделили рекомбинантные белки и полу­чили препараты комплексов с чистотой, достаточной для поиска условий крис­таллизации. Были получены мелкие кристаллы пентамерных комплексов из М. thermolithotrophicus и М. igneus. Для получения РНК-белкового комплекса был проведен поиск небольших фрагментов 23S рРНК, способных специфически связываться с пентамерным комплексом и формировать РНК-белковый комп­лекс, пригодный для кристаллизации. В результате нами были получены два фрагмента 23S рРНК из М. jannaschii длиной 95 нт и 82 нт, которые связывались со всеми тремя пентамерными комплексами с константой диссоциации порядка 2*10-8 М. Был проведен поиск условий кристаллизации для пентамер-ных комплексов с фрагментами РНК и получены игольчатые кристаллы' архей-ного пентамерного комплекса L10*(L7/L12)4 из М. igneus с 95 нт фрагментом 23S рРНК из М. jannaschii.

 

Донцова М.В.1 , Щербаков Д.В.1, Пиндл В.2, Гарбер М.Б.1

1 Институт белка РАН, Пущино

2 Институт медицинской химии и биохимии, Инсбрук (Австрия)