Вы здесь

Главная

RepA белок линейной плазмиды N15 обладает праймазной и хеликазной активностями

ID_Статьи: 
44.00

Целью нашей работы является исследование механизма репликации линейной ДНК с ковалентно замкнутыми теломерами у прокариот на примере бактериофага N15. Уникальным N15 является то, что в лизогенном состоянии он не интегрируется в хромосому Esherichia coli, а представляет собой линейную автономно реплицирующуюся плазмиду. Целью данного этапа работы являлась функциональная характеристика репликативного белка RepA, обеспечивающего репликацию ДНК N15. Анализ последовательности RepA выявил мотивы, характерные для бактериальных праймаз (EGFATG и DnD) и хеликаз (AGMGSGKS, - Walker box type А), а также структуры, характерные для белков, связывающихся с ДНК. На основании этого мы сделали предположение, что RepA может связываться с сайтом инициации репликации (ori), и обладать активностями праймазы и хеликазы. Следовательно, можно ожидать, что репликация N15 не будет зависеть от бактериальных генов праймазы, хеликазы и инициаторного белка DnaA. Мы установили, что репликация миниплазмиды, содержащей ген герЛ, не зависит от DnaA, бактериальной праймазы DnaG, хеликаз DnaB и Rep, а также от белка DnaC, участвующего в связывании DnaB хеликазы с ori сайтом Е. coli и многих плазмид. В то же время, ДНК полимераза III Е. coli необходима для репликации N15, что согласуется с отсутствием полимеразного домена в RepA. Известно, что RepA необходим и для репликации ДНК N15 в процессе литического развития, но для этого могут дополнительно требоваться и репликационные белки клетки-хозяина. Однако, мы показали, что DnaA, DnaG, DnaB, Rep и DnaC не влияют репликацию ДНК и в процессе литического развития N15. В целом, наши результаты позволяют сделать вывод о том, что RepA является многофункциональным белком, связывающимся с ori сайтом и обладающим активностями праймазы и хеликазы и, таким образом, функционально аналогичен репликазным белкам бактериальных плазмид, реплицирующихся по тета-механизму, и, в частности альфа-белку фага Р4.

 

Марданов А.В., Страхова Т.С., Равин Н.В.

Центр «Биоинженерия» РАН, Москва (Россия)