Вы здесь

Главная

Регуляторный белок Bacillus cereus hlyiir: взаимодействие с операторным участком гена гемолизина II

ID_Статьи: 
140.00

Порообразующие цитолитические токсины представляют собой одно из наи­более сильных и универсальных средств, с помощью которого проникающие мик­робы поражают макроорганизм хозяина. Эти токсины непосредственно спо­собствуют развитию инфекции, разрушая клетки различных тканей, а также вы­зывая ряд вторичных реакций в клетках-мишенях. Выяснение механизмов, кон­тролирующих экспрессию генов этих токсинов, является существенной частью исследований, направленных на изучение регуляции и эволюции патогенных свойств микроорганизмов.

Данная работа посвящена исследованию контроля экспрессии одного из поро-образующих цитолизинов В. cereus - гемолизина II. Ранее обнаружен транс­крипционный регулятор гена гемолизина II. Этот белок, HlyllR, с молекулярной массой 24kD, относится к семейству тетрациклиновых репрессоров. Он способен обеспечивать как негативный, так и позитивный контроль экспрессии гена hlyll.

Гомогенный препарат HlyllR был использован для изучения его ДНК-связы-вающих свойств. С помощью ДНКазы I удалось установить, что HlyllR экранирует 52 п.о., расположенные в регуляторной зоне гена гемолизина II и содержа­щие инвертированный повтор длиной 44 п.о. Делеция этого участка приводила к десятикратному уменьшению гемолитического фенотипа, как и делеции гена самого регулятора. Константа связывания HlyllR с ДНК равна 5,3±2,9 нМ, что является довольно высоким значением для ДНК-связывающих белков. Опреде­лен минимальный участок ДНК, связываемый этим белком. Эксперимент по определению молекулярной массы HlyllR в растворе показал, что белок элюи-руется с колонки в районе 45kD, что соответствует димерной форме. В комплек­се с ДНК-мишенью он обнаруживается в тетрамерной форме.

 

Родикова Е.А., Никитин Д.В., Бударина Ж.И.

Институт биохимии и физиологии РАН им. Т.К. Скрябина, Пущино