Вы здесь

Главная

Регуляция экспрессии гена глутамилэндопептидазы Bacillus intermedius

ID_Статьи: 
40.00

Протеиназы с узкой субстратной специфичностью широко применяются в белковой инженерии. Глутамилэндопептидаза Bacillus intermedius продуцируется в среду культивирования в малых количествах. Для создания эффективного суперпродуцента эндопептидазы необходимо в первую очередь исследовать пути регуляции экспрессии гена, кодирующего данный фермент.

Цель работы состояла в установлении механизмов регуляции экспрессии гена глутамилэндопептидазы В. intermedins. В рамках поставленной цели проводили компьютерньш анализ регуляторной области гена протеиназы, исследовали биосинтез глутамилэндопептидазы В. intermedins, а также изучалась экспрессия гена фермента в мутантном штамме В. subtilis QB4883 (деления гена, кодирующего регуляторный белок DegU). В регуляторной области гена глутамилэндопептидазы были обнаружены консервативные последовательности AGAGNI3TCCAG (гомология с сайтом для связывания белка DegU -78%), C(G)AAAA (сайт связывания регулятора AbrB) и TGGCTGN7TTGCA (гомология с 8ь-зависимым промотором - 82%). Известно, что в клетках В. subtilis SigL-фактор и двухкомпонентная система DegS-DegU (индуцируемая солевым стрессом) контролируют синтез ферментов деградации, a AbrB является репрессором ряда генов, связанных со спорообразованием. Нами показано, что в присутствии высоких концентраций органических и неорганических солей продукция глутамилэндопептидазы штаммами В. intermedins заметно возрастала. Штамм В. subtilis QB4883 был протрансформирован плазмидой с полным геном глутамилэндопептидазы В. intermedins. Исследована экспрессия гена в клетках В. subtilis в обычных условиях и при солевом стрессе. Во всех случаях специфическая активность глутамилэндопептидазы не обнаруживалась. Таким образом, предполагается, что экспрессия гена глутамилэндопептидазы Я intermedins контролируется системой наподобие DegS-DegU В. subtilis.

 

Вишняков И.Е., Сафина Д.Р., Габдрахманова Л.А.

Казанский государственный университет, Казань