Вы здесь

Главная

Разработка метода очистки гликопротеина gD вируса болезни Ауески (Suid herpesvirus 1) с помощью аффинной хроматографии на основе моноклональных антител

ID_Статьи: 
46.00

Вирус болезни Ауески (ВБА), представитель альфагерпесвирусов, вызывает широко распространенное заболевание различных видов животных. Важнейшую роль в адсорбции и проникновении вируса в клетки, а также в индукции защитного иммунитета, играет гликопротеин gD. Многие вопросы, касающиеся механизмов функционирования gD ВБА и закономерностей формирования иммунного ответа на gD, не исследованы. Целью данной работы было получение панели моноклональных антител (мкАТ) к гликопротеину gD ВБА и разработка метода очистки gD с помощью аффинной хроматографии.

В ходе работы была получена широкая панель gD-специфических мкАТ. Специфичность мкАТ к gD определяли с помощью радиоиммунопреципитации и иммуноблоттинга. С помощью полученных мкАТ, а также gD-специфических мкАТ, предоставленных проф. Т. Меттенляйтером (Тюбинген, Германия), проведено топографическое эпитопное картирование гликопротеина. На гликопротеине выявлены 10 различных эпитопов и эпитопных групп. Ряд антител (42/11 и 38/22) обладали вируснейтрализующей активностью в присутствие и в отсутствии комплемента. С использованием полученных gD-специфических мкАТ разработан метод очистки гликопротеина gD из вирионов ВБА с помощью аффинной хроматографии. Чистота препарата gD, согласно данным электрофореза, составляла 98-99%. gD не был подвержен протеолитической деградации и сохранял нативную структуру. gD обладал функциональной активностью и специфически связывался с клеточными рецепторами.

Полученный аффинно-очищенный гликопротеин gD будет использован в дальнейшей работе для изучения механизмов взаимодействия вируса болезни Ауески с клеточными рецепторами и формирования защитного иммунитета.

 

Врублевская В.В., Корнев А.Н., Моренков О.С.

Институт Биофизики Клетки РАН, Пущино (Россия)