Вы здесь

Главная

Разработка ДНК-вакцины против Pseudomonas aeruginosa

ID_Статьи: 
85.00

Pseudomonas aeruginosa - возбудитель широко распространенной больничной инфекции, поэтому в настоящее время уделяется большое значение разработке новых средств борьбы с данным патогеном. В настоящем исследовании использован высокоантигенный белок наружной мембраны P. aeruginosa - oprF, играющий значительную роль в формировании иммунного ответа организма.

Ген oprF P. aeruginosa был синтезирован с помощью ПЦР при использовании в качестве матрицы бактериальной ДНК(штамм РА 103). Полученный амплификат встроен в плазмиду pQE-30 (QIAGEN), используемую для экспрессии в клетках E.coli (штамм Ml5). Наличие искомой встроенной последовательности подтверждено секвенированием. Возможность синтеза рекомбинантного белка с использованием полученной конструкции была показана в результате экспрессии клонированного гена и анализа белковых продуктов в полиакриламидном геле. Используя сыворотку кролика, гипериммунизированного P. aeruginosa , в иммуноблоте была подтверждена специфичность рекомбинантного белка.

Ген, кодирующий специфичный рекомбинантный белок oprF, был перенесен в плазмиду pCI (Promega) для экспрессии в эукариотических клетках. В результате получена конструкция, содержащая ген oprF под контролем CMV промотора. Эффективность экспрессии этой конструкции проверена с использованием культуры эукариотических клеток COS-1. Анализ белковых продуктов, синтезируемых в эукариотических клетках, проводился методом иммуноблота. Показано, что после трансфекции клеток COS-1 рекомбинантной плазмидной конструкцией, в них синтезировался белок, специфично реагирующий с сывороткой кроликов гипериммунизированных Р. aeruginosa.

Таким образом, приведенные данные свидетельствуют о возможности проводить исследования по использованию полученной конструкции в качестве вакцины.

 

Торопчина Ю.Н., Калошин А.А.

НИИ вирусных препаратов им. Анджапаридзе РАМН, Москва (Россия)