Вы здесь

Главная

RAPD-анализ Betula pendula Roth. Var. Carelica mercl

ID_Статьи: 
16.00

В настоящее время метод изучения полиморфизма ДНК по случайно ампли-фицированным фрагментам (RAPD) широко используется для изучения гено­мов лесных древесных видов: конструирование генетических карт, анализ гене­тической структуры популяций, генотипирование, маркирование признаков, а также в реализации целого ряда селекционных программ.

Целью данной работы является разработка методических основ RAPD-ана-лиза применительно к березе карельской. В качестве материала для анализа были использованы ткани почек. Для выделения ДНК использовали навеску тканей массой около 30 мг. Экстракция тотальной ДНК проводилась по методи­ке, предложенной Дороховым Д.Б. и Клоке Э. (Генетика, 1997), с модификация­ми. Масса препаратов выделенной ДНК составила 20-35 мкг, D260/ D280 = 1,58. Состав ПЦР смеси следующий: 100 мМ Трис-HCl, рН 9,2, 35 мМ MgCl2, 250 мМ КС1 - 2,5 мкл, 250 нМ ЭДТА - 0,5 мкл, 10 мМ дНТФ - 1,5 мкл, 20 мМ раствор праймера - 0,5 мкл, образец ДНК (40 нг/мкл) - 0,5 мкл, Taq ДНК-полимераза (2,5 ед./мкл) - 0,5 мкл, общий объем смеси доводился водой до 25 мкл. Ампли­фикацию проводили программе, состоящей из 4 этапов. 1 этап - 94°С, 5 мин; (Тm-5)°С, |1 мин; 72°С, 3 мин (1;цикл), 2. этап - 94 °C, 1 мин; (Tm-5)°C, 1 мин; 72°С,

3 мин (4 цикла). 3 этап - 94°С, 1 мин;, (Tm-2)°C, 1 мин; 72°С, 3 мин (30 циклов).

4 этап - 72°С, 8 мин; 8°С, 10 мин (1 цикл). Электрофоретическое разделение продуктов амплификации проводили в 10% ПААГ с применением 0,112 М Трис-ацетатного буфера (рН = 6,4). Визуализация электрофоретических спектров достигалась за счет окрашивания препаратами серебра. В результате проведен­ной ПЦР с 7 произвольными десятичленными праймерами была выявлена 21 амплимерная:зона, 11 из которых у исследованных образцов оказались полимор­фными. Выявленные амплимерные зоны могут использоваться в качестве удоб­ных генетических маркеров, при решении вопросов, связанных с генетикой и селекцией этой хозяйственно-важной породы.

 

Баранов О.Ю.

Институт леса НАН Беларуси, Гомель