Вы здесь

Главная

Протомитохондрии in vitro

ID_Статьи: 
124.00

На основании данных электронной и оптической микроскопии митохондри-альные частицы клеток животных и растений можно подразделить на три попу­ляции: а) протомитохондрии (ПМ) - частицы размером менее 0,45 мкм; б) зрелые митохондрии - 0,45-1,0 мкм; в) старые митохондрии - свыше 1,0 мкм.

О биохимических особенностях ПМ ничего не известно. Нами было обнаруже­но, что ПМ из сердца быка можно получить путем пропускания митохондриаль­ной суспензии через миллипоровые фильтры. В данной работе мы провели пер­вый ферментативный, флуоресцентный и микроскопический анализ ПМ, полу­ченных из печени крысы. Путем центрифугирования суспензии печеночного гомогената при 14000 g и 26000 g сначала были получены два осадка разной плотности (0-14 и 0-26), а затем каждый был ресуспендирован и пропущен через фильтр 0,2 мкм FP 030/3 или 0,45 мкм FlowPoreD. Полученные фракции ПМ-0,2 и ПМ-0,45 состоят из частиц, однородных по плотности и размеру. Мик­роскопия в темном поле и в проходящем свете (при окрашивании митохонд­риальными красителями) показала отсутствие разрушения митохондрий на фильтрах. Параметры триптофановой флуоресценции у всех суспензий были сходны, что говорит об отсутствии заметной денатурации белков на фильтрах. Интенсивность флавиновой флуоресценции после фильтрации возрастала (ве­роятно из-за выхода некоторых флавинов из частиц в воду). Скорость окисле­ния НАДН в дыхательной цепи у ПМ-0,2 и ПМ-0,45 была лишь немного сниже­на по сравнению с 0-14 и 0-26. Это указывает на наличие у ПМ полноценной дыхательной цепи. Скорость НАДН:феррицианид- и сукцинат:пНТФ- редуктаз-ных реакций у ПМ-0,2 и ПМ-0,45 оказалась в несколько раз выше, чем у 0-14 и 0-26. Это - либо результат изменения свойств ферментов на фильтрах, либо особенность малых частиц. Температурные зависимости НАДН-дегидрогеназ-ной реакции, а также НАДН:феррицианид-редуктазной реакции различались мало. Это говорит о сходстве НАДН-дегидрогеназы митохондрий и ПМ.

 

Перцович С.И.1,2 , Анисимов Р.Л.1, Векшин Н.Л.2

1 Пущинский государственный университет, Пущино,

2 Институт биофизики клетки РАН, Пущино