Вы здесь

Главная

Протеомные исследования и анализ потоков углерода в метаболизме клеток E.coli с терморегулируемой экспрессией треонинового оперона

ID_Статьи: 
25.00

Анализ распределения потоков углерода в клетках рекомбинантного штамма E.coli W3110 с терморегулируемой экспрессией треонинового (thr) оперона, выращенных при различных температурах на минимальной среде с добавлением [С13]-глюкозы, проводился методом С^'Н^ЯМР-спектроскопии. Белки, синтезируемые при росте этих бактерий в тех же условиях, но без добавления [С13]-глюкозы, исследовались с помощью двумерного гель-электрофореза с последующей масс-спектрометрией различающихся полипептидов. В клетках изучаемого штамма мутантный thrA *£С-оперон (мутация приводила к снятию ретроингибирования треонином продукта гена thrA*) экспрессировался в составе рекомбинантной плазмиды, содержащей также ген lc/ts857, под контролем промотора 1PR. Культивирование бактерий в условиях частичной дерепрессии thrA *ЯС-оперона (Т = 39°С) приводило к изменению клеточного метаболизма, проявлявшемся, в частности, в накоплении треонина (Thr) в среде.

Было зарегистрировано увеличение (на 17%) потока углерода на стадии образования Оксалоацетата (ОАА) из Фосфоенолпирувата (PEP), поскольку сверхсинтез Thr приводит к усилению потока PEP а ОАА aAsp a Thr. Кроме белковых продуктов треонинового оперона увеличение уровня накопления наблюдалось также и ферментов LeuA, В, D, что может быть обусловлено снижением пула их субстрата, пирувата, в клетках.

 

Беневоленский М.С.1, Манухов И.В.2, Киверо А.Д.2, Бочаров Е.В.3

1ЗАО «НИИ Аджиномото-Генетика», Москва

2Тосударственный научный центр РФ «ГосНИИгенетика», Москва

3Институт биоорганической химии им. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН, Москва