Вы здесь

Главная

Проблемы использования биорепортеров, несущих гены деградации сложных субстратов

ID_Статьи: 
93.00

Исследовалась люминесценция трансгенных штаммов Escherichia coli Z905-137 с плазмидой pPHL7, содержащей клонированный под 1ас-промотором биолюминесцентный оперон (Amp+, luxCDABE) и Pseudomonas fluorescens 5 RL с клонированной в плазмиде pUTK21 под контролем салицилатного промо­тора системой биодеградации нафталина и бактериальной биолюминесценции (Amp+, luxCDABE, Nah+). Первый штамм обладает конститутивной люминес­ценцией, а второй требует индукции салицилатом или нафталином. Было пока­зано, что на определенном интервале концентраций салицилата (1-20 мг/л) штамм P. fluorescens 5RL дает линейное увеличение интенсивности люми­несценции. При дальнейшем увеличении концентрации наблюдается плавное затухание. Данные были проверены несколько раз на средах, содержащих ампи­циллин (для того, чтобы поддерживать копийноеть плазмиды на высоком уров­не) и контрольных. Заметных отличий выявлено не было. Объяснение наблюдаемому явлению было получено, когда аналогичные концентрации салицилата были исследованы в их влиянии на конститутивную (не зависящую от промо­тора) люминесценцию. Здесь наблюдалось остро ингибирующее действие, пря­мо пропорциональное концентрации детергента. Предполагается, что небольшие концентрации детергента индуцируют гены его биодеградации, и, соответствен­но, маркерные гены. Повышение концентрации не уменьшает скорость разложе­ния субстрата, но уменьшает физическое проявление маркерных генов - на­блюдается затухание люминесценции вплоть до нулевых значений. Из этих представлений вытекает следующее предложение по усовершенствованию су­ществующих методов мониторинга - при измерении растворов детергента неизвестной концентрации пользоваться калибровочными графиками концент­рационной индукции с наложением на ингибирование конститутивной люми­несценции.

 

Лесняк Д.В.

Красноярский государственный университет, Красноярск