Вы здесь

Главная

Применение ультрафильтрации биологических жидкостей на мембранах Amicon при диагностике онкологических заболеваний

ID_Статьи: 
32.00

При анализе трансренальной (преодолевшей почечный барьер) ДНК онкологических больных сталкиваются с рядом проблем: низкой концентрацией мутантных аллелей, избытком аллелей дикого типа, фрагментацией ДНК нуклеазами. Решение этих задач разрабатывается в следующих направлениях: повышение чувствительности ПЦР; расщепление последовательностей дикого типа, предшествующее ПЦР; разработка методов выделения ДНК, увеличивающих выход низкомолекулярных фрагментов. Существующие методы выделения ДНК в этом отношении недостаточно эффективны.

В данной работе рассматривается возможность применения для выделения трансренальной ДНК мембран Amicon. В процессе концентрации из мочи удаляются эпителиальные клетки, различные белковые включения. Сконцентри­рованная ДНК идентифицируется электрофорезом в 2% агарозном геле. Концентрат хорошо амплифицируется ПЦР. Были наработаны фрагменты онкогена K-RAS длиной 87 п.о. и гена-супрессора р53 длиной 137 п.о. Получены данные, свидетельствующие о том, что предлагаемый метод концентрации ДНК существенно увеличивает выход фрагментов ДНК, содержащих мутантные аллели.

 

Кондратова В.Н.

Институт канцерогенеза Российского онкологического научного центра им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва (Россия).