Вы здесь

Главная

Получение рекомбинантных штаммов Streptomyces cyanogenus S136 -продуцентов новых ландомицинов

ID_Статьи: 
52.00

Объектом наших исследований является продуцент нового противоопухолевого антибиотика ландомицина А -штам S cyanogenus S136. Ландомицин А содержит агликон и гексасахаридную цепь, состоящую из четырех D-оливоз и двух L-родиноз. Мы разработали систему переноса рекомбинантных ДНК в S. cyanogenus S136 при помощи межродовой конъюгации с донорным штаммом Е. coli ЕТ12567 (pUB307), Эта система позволила применить метод «нокаутов» генов биосинтеза ландомицина А (lan-генов) для изучения их функций. Для этого необходима гомологическая рекомбинация между фрагментами lan-кластера, клонированными в плазмид ах, и хромосомой S. cyanogenus S136. Мы показали, что lan-фрагмента размером 1,2 т.п.н, клонированого в нерепликативной плазмиде pOJmel, достаточно для ее интеграции в хромосому. Следующим этапом работы было изучение функции гена lanGT3, кодирующего одну из гликозилтрансфераз. Для этого мы клонировали мутантный аллель гена lanGT3 в pOJmel и перенесли полученную плазмиду в штамм S. cyanogenus S136. При помощи ПЦР показано, что эксконъюганты штамма несут рекомбинантную плазмиду, интегрированную в хромосому. В результате двойного кроссинговера ген lanGT3 в штамме S. cyanogenus S136 был заменен на его мутантный аллель. В экстрактах этого штамма обнаружен ландомицин Е, содержащий три сахара. Это свидетельствует о том, что ген lanGT3 контролирует присоединение четвертого сахара в молекуле ландомицина А.

 

Грек М.Р.1,  Лужецкий А.Н.1, Хофмейстер Д.2, Федоришин М.Ю.1, Лябах Н.А.1, Бехтольд А.2, Федоренко В.А.1

1Львовский национальный университет имени Ивана Франко, Украина

2Фрайбургский университет, ФРГ