Вы здесь

Главная

Получение продуцента рекомбинантного цитокина lif

ID_Статьи: 
34.00

В настоящее время внимание исследователей привлечено к эмбриональным стволовым клеткам (ЭСК) благодаря их способности встраиваться в развитие целого зародыша. Наиболее изучены ЭСК мыши, на которых показано, что для успешного их использования необходимо присутствие в среде ростовых факторов и цитокинов, одним из которых является LIF (Leukemia Inhibitory Factor). LIF активирует процессы роста и поддерживает плюрипотентное состояние ЭСК в культуре. Для культивирования ЭСК используются рекомбинантные препараты LIF, однако их высокая цена накладывает определенные ограничения на проведение этих работ. В связи с этим была предпринята попытка для получения стабильного продуцента рекомбинантного цитокина LIF в лабораторных условиях с целью повышения эффективности культивирования и снижения материальных затрат при работе с ЭСК мыши в условиях in vitro.

Фрагмент, содержащий последовательность, кодирующую цитокин LIF, был амплифицирован методом ПЦР на ДНК, выделенной из лимфоцитов мыши. Затем этот фрагмент был встроен в полилинкер плазмиды pQE-30 (QIAGEN), содержащий индуцибельный промотор фага Т5 и последовательность терминатора, необходимые для экспрессии клонированного гена. Наличие вставки было под­тверждено рестриктным анализом и секвенированием концевых последовательностей клонированного фрагмента. Полученная конструкция использована для трансформации клеток штамма Е. coli М15, содержащего репрессорную плазмиду pREP-4. Экспрессию гена lif в этой системе оценивали с помощью химического индуктора IPTG. Наличие цитокина подтверждали электрофоретическим анализом суммарного протеинового пула в 10% полиакриламидном геле по методу Леммли. Полученная конструкция содержит ген lif, способный активно экспрессировать цитокин в E. coli.

 

Петрова P.P.1 , Калошин А.А.2, Капралова И.В.1

1 Институт биофизики клетки РАН, Пущино 2 НИИ биомедицинской химии РАМН, Москва