Вы здесь

Главная

Получение препарата гомогенной ксилозо(глюкозо)изомеразы Artнrobасter species в-5

ID_Статьи: 
60.00

В настоящее время для промышленного производства глюкозо-фруктозных си­ропов и кристаллической фруктозы широко применяются иммобилизованные клетки микроорганизмов-продуцентов ксилозо(глюкозо)изомеразы, а также им­мобилизованный неочищенный или частично очищенный фермент. Получена в высокоочищенном состоянии и иммобилизована на различных носителях ксило-зо(глюкозо)изомераза многих бактерий и актиномицетов, в т.ч. Actinomyces olivocinereus, Bacillus coagulans, Lactobacillus brevis, Streptomyces atratus, S. olivaceus, S. olivochromogenes и некоторых других. Цель данного исследова­ния - разработка метода очистки и получение препарата гомогенной ксилозо(г-люкозо)изомеразы, продуцируемой перспективным в промышленном отношении продуцентом Arthrobacter species В-5.

Проведена практически полная экстракция клеточносвязанной ксилозо(глю-козо)изомеразы из механически разрушенной с помощью кварцевого песка био­массы бактерий Arthrobacter sp. 0,2 М К,Nа-фосфатным буфером (рН 7,8) при 29°С в течение 1 ч при перемешивании.

Подобрана схема очистки фермента, включающая: 1) термообработку бес­клеточного экстракта при 70°С в течение 10 мин. в присутствие 0,005 М Со2+ (для удаления балластных термолабильных белков); 2) обработку 1 М раство­ром МпС12 (0,05 V/V) при 4°С в течение 30 мин (для осаждения нуклеиновых кислот); 3) дифференциальное фракционирование сульфатом аммония, сначала 40%-ой, затем - 60%-ной степени насыщения, 4) обессоливание на колонке с Molselect G-25; 5) гель-фильтрацию на колонке с Toyoaperl HW-55; 6) ионообмен­ную хроматографию на колонке с DEAE-целлюлозой.

В результате проведенных исследований получен препарат очищенной в 35,1 раза ксилозо(глюкозо)изомеразы Arthrobacter sp. Гомогенность очищенно­го фермента подтверждена рехроматографией на колонке с Toyoaperl HW-55, а также нативным и SDS-электрофорезом в ПААГ.

 

Казакевич И.О.

Институт микробиологии НАН Беларуси, Минск (Беларусь)