Вы здесь

Главная

Получение поликлональных антител для Dbl и РН доменов онкогенного белка Bcr-Abl и для слитой части белка Abl-Bcr

ID_Статьи: 
43.00

В результате реципрокной транслокации t(9;22)(q 34;q 11) возникают два гибридных гена Всг-АЫ и Abl-Всг, что является первопричиной развития острого лимфобластного лейкоза (ОЛЛ) и хронической миелолейкемии (ХМЛ). Ген Всг-АЫ находится на Ph'-хромосоме. Ген Abl-Всг расположен на 9 хромосоме. В результате альтернативного сплайсинга первых экзонов - 1а и lb - Abl части гена Abl-Bcr, могут експресироваться две формы его белкового продукта. Предполагается, что белки Abl-Всг la и lb отличаются местом локализации в клетке. Разрыв гена Всг может происходить в трех различных точках, вследствие чего могут возникнуть три формы белка Всг-Abl: р 190, р210 и р230. При наличии белка р 190 наблюдается развитие ОЛЛ, при наличии белка р210, в состав которого входят Dbl гомологичный и РН (pleckstrin homology) домены, — ХМЛ и ОЛЛ. Таким образом, присутствие этих доменов является благоприятным диагностическим признаком.

Нами были клонированы участки гена Всг-АЫ, соответствующие Dbl и РН доменам, в вектора рЕТ32В. Рекомбинантные белки DDBA и PDBA получили в виде телец-включения и использовали для получения поликлональных антител. Специфичность поликлональных антител тестировалась методом Вестерн-блотинг. Последние используются для детекции химерного белка Всг-Abl и его нормального клеточного гомолога Всг. Поликлональные антитела будут использованы для определения внутриклеточной локализации белков Всг-АЫ и Всг. Также нами был клонирован слитый участок гена Abl-Bcr la. Для этого методом РТ-ПЦР был амплифицирован слитый участок гена Abl-Bcr la размером 300 п.о. и клонирован в вектор рЕТ32В. Полученная конструкция будет использована для экспресии рекомбинантного бежа и поликлональных антител Abl-Bcr la, которые будут использованы для выяснения локализации белка в клетках больных ХМЛ.

 

Волошаненко О.С., Дубровская А.Н.

Институт молекулярной биологии и генетики, Киев (Украина)