Вы здесь

Главная

Получение панкреатической липазы с повышенной стабильностью

ID_Статьи: 
98.00

Панкреатическая липаза или препараты ее содержащие нашли широкое применение на практике. Однако, недостатком очищенных, а также частично очищенных препаратов является относительно низкая стабильность. Одной из причин такой нестабильности является присутствие в препаратах липаз протеин аз. Липаза, сама являясь белком, т.е. субстратом протеиназ, в результате чего она постоянно подвергается протеолизу. Несомненно, этот процесс протекает и в процедурах очистки липазы. В результате, наблюдается низкий выход из сырья, а также последующие потери. В настоящей работе мы показали, что стабильность фермента повышается после удаления протеиназ. В качестве основной методики очистки была выбрана следующая последовательность операций: получение «ацетонового» порошка из панкреатической железы-экстракция буферным раствором-ионообменная хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе-гель-фильтрация на сефадексе G-100. В результате получали препараты липазы со степенью очистки 240-250 раз, с удельной активностью 16000-20000 ед/мг белка. Нами была введена дополнительная обработка экстракта путем его элюции через колонку(2х15 см), наполненную сорбентом, специально синтезированным для удерживания протеиназ, представляющим собой гранулированный полиамид(до 0,1 мм) с иммобилизованным ингибитором протеиназ из люцерны. В результате степень очистки липазы возросла до 480-520 раз, выход очищенного фермента по общей активности в 1,6 раза, а лиофильно высушенный препарат липазы хранился более двух лет с потерей всего лишь 12% активности, вместо 65%. Температурная стабильность возросла: время полуинактивации при 40°С составило 6 час, вместо 1,5 час, а оперативная стабильность при расщеплении масел - 48 час, вместо 12 час (время 50% потери активности). Таким образом, удаление протеиназ с помощью биоспецифического сорбента позволяет не только улучшить методику очистки, но и повысить эффективность применения липазы в биотехнологических процессах.

 

Рахимова Н.М.

Национальный университет Узбекистана им.М.Улугбека, Ташкент, Узбекистан