Вы здесь

Главная

Получение очищенных препаратов гемолизина II

ID_Статьи: 
6.00

Патогенные бактерии вырабатывают токсины повреждающие макроорганизмы, преодолевая их защитные системы. Основная роль в патогенезе принадлежит цитолитическим токсинам. В. cereus, синтезирует ряд токсинов, которые способствуют развитию инфекции, и может вызывать диаррейный и эметический синдромы, а также заболевания глаз, нервной системы, маститы и другие болезни. Один из цитолитических порообразующих токсинов В. cereus ~ гемолизин II (HIyII) идентичен белку возбудителя сибирской язвы В. anthracis и представляет особый интерес, так как он является гомологом такого опасного токсина, как альфа-токсин Staphylococcus aureus.

Гемолизин II обнаружен более 20-и лет назад, однако, белок до сих пор практически не исследован, так как не удавалось получить высокоочищенный препарат. В 1993 году в ИБФМ РАН был клонирован ген гемолизина IL и определена нуклеотидная последовательность этого гена. Для очистки Hlyll был использован рекомбинантный штамм. Гемолитическая активность определялась как в культуральной среде, так и внутри клеток. Была показана преимущественная внеклеточная локализации гемолизина, экспрессируемого в Е. coli. Это указывает, что Hlyll, являясь секреторным белком, синтезируется в форме предшественника, имеющего сигнальный пептид. В результате проведенной работы подобраны оптимальные условия вырадшзаня рекомбинантных штаммов Е. coli, для получения максимального синтеза как внутриклеточного, так и внеклеточного белка. При очистке внеклеточного Hlyll применяли следующие методы: эмпирическая афинная хроматография; гидрофобная хроматография и гельфильтрация. Эмпирические аффинные сорбенты получали из 30-и различных, хлортриазиновых красителей, которые ковалентно связывали с гидрофильным носителем в отдельных колонках. Внутриклеточный белок был очищен ионнообменной хроматографией и FPLC-гельфильтрацией. В результате были получены высокоочищенные препараты бежов (примерно 90% чистоты по SDS-элекрофорезу в ПАТ) и исследованы их некоторые свойства.

 

Андреева Ж.И.1, Нестеренко В.Ф.2, Солонин А.С.3

Институт биохимии и физиологии микроорганизмов, Пущино.