Вы здесь

Главная

Получение и очистка рекомбинантного интерферона альфа человека, экспрессируемого в метилотрофных дрожжах Pichia pastoris

ID_Статьи: 
88.00

Одним из перспективных подходов в развитии новых методов лечения многих заболеваний является использование лекарственных препаратов на основе белков человека. К таким белкам относится интерферон альфа (ИНб). Являясь представителем семейства цитокинов, ИНб обладает антивирусной, антипролиферативной и иммуномодулирующей активностями. Это позволяет использовать ИНб в качестве терапевтического средства для лечения онкологических и вирусных заболеваний. В настоящее время наиболее перспективным подходом для получения биологически активных препаратов в значительных количествах является использование микроорганизмов. Применение для этих целей метилотрофных дрожжей Pichia pastoris позволяет значительно повысить выход рекомбинантного белка, а также дает возможность получать аутентичные секреторные формы белков. Целью настоящей работы является разработка схемы очистки рекомбинантного ИНб16 человека, экспрессируемого в метилотрофных дрожжах Pichia pastoris. Штамм дрожжей Pichia pastoris, секретирующий ИНб 16 в культуральную среду, был получен ранее в нашей лаборатории. Нами были отобраны клоны, обеспечивающие наибольший уровень продукции рекомбинантного белка. Проведено сравнение различных схем очистки ИНб 16, включающих в себя ультрафильтрацию культуральной среды, высаливание сульфатом аммония и разделение при помощи ионообменной хроматографии и гель-фильтрации. Предлагаемая схема очистки позволяет получать препарат, обогащенный ИНб16 на 80% и обладающий биологической активностью.

 

Пантелеева И.Г., Парфенова Л.В., Андреева О.Ю., Падкина М.В.

Лаборатория биохимической генетики Биологического НИИ Санкт-Петербургского государственного университета.