Вы здесь

Главная

Получение фракций активного хроматина после фрагментации ДНК в составе ядер ДНКазой II

ID_Статьи: 
54.00

ДНК в ядрах эукариот организована в компактные частицы (нуклеосомы), образующие хроматиновую фибриллу с диаметром 30 нм и коэффициентом компактизации около 50. Механизмы декомпактизации нуклеосом при активации генов остаются неизвестными. Мы исследовали характер фрагментации ДНК гена tat ДНКазой II в ядрах печени крыс, где он дерепрессирован, и условия избирательной экстракции его фрагментов. Использовали методы dot- и блот-гибридизации. ДНК-зонды получали из плазмиды pUC19 х(рС), содержащей tat ген. При кратком воздействии ДНКазы II в высоких концентрацях суммарный хроматин переваривался преимущественно до моно-и динуклеосом (170 -400 п.н.), при этом tat ДНК сохранялась в гидролизатах в виде протяженных фрагментов (2000-12000 п.н.), более половины которых соответствовало длине их единиц транскрипции (11000 п.н.). Фрагменты tat гена не освобождались в инкубационную среду и в раствор безыонной сахарозы, солюбилизирующей более 90% хроматина. Активный tat-хроматин, осаждающийся в этих условиях, был разделён на две субфракции: раствор 0,2 М NaCl, содержащий АТФ и Mg2+, экстрагировал только тяжёлые компоненты пика tatHK исходных гидролизатов (10000-12000 п.н.). Фрагменты длиной от 2000 до 8000 п.н. удерживались в конечном ядерном остатке. В клетках печени около 40% tat генов индуцированы к транскрипции, остальные сохраняют компетентное состояние. Мы предполагаем, что фракция полноразмерных единиц транскрипции представляет компетентные гены. Транскрипция индуцирует появление нуклеазочувствительных зон, возможно фланкирующих РНК полимеразы. При их расщеплении образуются сегменты кодирующих областей, лежащие между очагами транскрипции, прочно связанные с нерастворимыми ядерными структурами. Для подтверждения этих предположений требуются дальнейшие исследования.

 

Павлова Е.Ю.

Санкт-Петербургский государственный университет, Санкт-Петербург (Россия).