Вы здесь

Главная

Поиск новых генов, участвующих в биогенезе пероксисом метилотрофных дрожжей Hansenula polymorpha HF246

ID_Статьи: 
47.00

Пероксисомы - важные органеллы эукариотических клеток, участвующие в разложении образующейся перекиси водорода. Функции пероксисом варьируют и могут включать такие процессы, как синтез холестерина и липидов у животных, гликолиз у трипаносом, фотодыхание в листьях растений и метаболизм глиоксилата в прорастающих семенах растений. Дефекты в биогенезе (созревании) пероксисом у человека приводят к нарушениям в окислении липидов и ряда других гидрофобных соединений, что связано с возникновением наследственных заболеваний, среди которых наиболее тяжелая форма - болезнь Целвегера, являющаяся причиной ранней детской смертности.

Дрожжи - перспективный модельный объект для изучения биогенеза пероксисом благодаря жизнеспособности мутантов по этому процессу (рех) и возможности контролировать пролиферацию и ферментативный состав матрикса условиями культивирования клеток, что способствовало получению больших коллекций рех-мутантов у различных видов дрожжей и клонированию РЕХ-генов. К настоящему моменту у разных видов дрожжей известно не менее 30 РЕХ-генов. У метилотрофных термотолерантных дрожжей Hansenula polymorpha, пероксисомы участвуют в детоксикации перекиси водорода и формальдегида. Создание коллекций рех мутантов у данного вида дрожжей необходимо для поиска и идентификации новых генов, участвующих в этом жизненно важном процессе.

В результате обработки N-HHTpo-N-нитрозогуанидином клеток метилотрофных дрожжей Hansenula polymorpha HF 246 leu 1-1 нами получена коллекция из 227 мутантов, не способных расти на метаноле при повышенной температуре (45°С). Выявлено 94 температурочувствительных (ts) мутанта, не растущих на метаноле при 45°С и растущих при оптимальной температуре (37°С). Поскольку исходный штамм экспрессирует GFP-SKL (Green Fluorescence Protein), пероксисомы полученных мутанов были охарактеризованы с использованием люминесцентного микроскопа.

Два ts мутанта с единичной рецессивной мутацией и цитоплазматической локализацией GFP были выбраны для дальнейшей работы. Комплементирование библиотекой генов позволило клонировать два новых гена, участвующих в образовании пероксисом у данного вида дрожжей. Получены делеции по соответствующим генам. Свойства делеционных мутантов изучаются.

 

Курбатова Е.М.

Институт биохимии и физиологии микроорганизмов, Пущино (Россия)