Вы здесь

Главная

Поиск и идентификация белков, специфично взаимодействующих с мажорным белком цитоплазматических МРНП р50

ID_Статьи: 
130.00

Мажорный коровый белок цитоплазматических мРНП клеток млекопитаю­щих, р50, принадлежит к семейству белков с доменом холодового шока. В бакте­риальных клетках эти белки синтезируются в ответ на понижение температу­ры. В ядре эукариотических клеток белки этого семейства регулируют транс­крипцию многих генов, а в цитоплазме отвечают за общую структурную органи­зацию, локализацию и упаковку мРНК в мРНП; в частности, соотношение р50/мРНК определяет трансляционный статус, этой мРНК. Логично предполо­жить, что в эукариотической клетке р50 взаимодействует со многими белками, и в результате этого могут изменяться свойства как р50, так и его молекуляр­ных партнеров, что является жизненно важным для клетки.

Мы осуществили поиск белков, взаимодействующих с р50, в лизатах различ­ных органов кролика. Проводилась аффинная хроматография этих лизатов на колонке с p50-BrCN сефарозой. Было обнаружено, что с р50 взаимодействует примерно 20 белков. Мы идентифицировали два из них: тубулин и гликоген-фосфорилазу. Тубулин был определен при помощи антител. Также было показа­но прямое взаимодействие р50 с тубулином методом western-blot overlay, и ис­следовано влияние фосфорилирования р50 на это взаимодействие. Гликоген-фосфорилаза была идентифицирована методом масс-спектрометрии. Кроме того, мы показали, что взаимодействие гликогенфосфорилазы с р50 выдерживает вы­сокую ионную силу и не опосредовано связыванием с РНК.

В настоящее время изучается влияние мРНК на взаимодействие р50 с тубу­лином и гликогенфосфорилазой, а также влияние р50 на ферментативную ак­тивность гликогенфосфорилазы.

 

Попова Н.В., Скабкина О.В., Овчинников Л.П.

Институт белка РАН, Пущино