Вы здесь

Главная

Поиск белков, взаимодействующих с Na, К-атразой

ID_Статьи: 
2.00

Na, К-АТРаза является интегральным белком плазматической мембраны, обес­печивающим трансмембранный перенос ионов Na+ и К+ против электрохимического градиента, сопровождающийся гидролизом АТР. Фермент играет важ­ную роль в функционировании различных тканей, поэтому регуляция активнос­ти Na, К-АТРазы представляет значительный интерес для исследователей. Ак­тивность Na, К-АТРазы регулируется некоторыми эндогенными белками-регуля­торами, которые взаимодействуют непосредственно с молекулой фермента. Вы­явление и идентификация таких белков позволят более детально изучить меха­низмы регуляции фермента.

В настоящей работе для обнаружения цитоплазматических белков, взаимо­действующих с очищенным мембранным препаратом Na, К-АТРазы выделен­ных из солевых желез уток, использовалось несколько подходов: аффинная хро­матография с иммобилизацией очищенного мембранного препарата Na, К-АТРа­зы на BrCN-активированной агарозе, использование ковалентно сшивающих би­функциональных агентов и метод «оверлэй». В последнем случае белки гомо-гената разделяли с использованием ЭФ в ПААГ, после чего белки переносили с помощью блоттинга на нитроцеллюлозу и инкубировали с Na,K-ATPaзofой. Комп­лекс Na, К-АТРазы с белками гомогената окрашивали с использованием поли-клональных антител против Na, К-АТРазы.

С применением этих методов выявлены белки с молекулярными массами 16,35,65,70,77 и 86,91,140 кДа, взаимодействующие с Na, К-АТРазой. Кроме того, с использованием сшивающих агентов подтверждено описанное ранее образова­ние олигомерных комплексов Na, К-АТРазы. Дальнейшие исследования будут направлены на идентификацию этих белков и установление их функций.

 

Акимова О.А., Мает Н.В.

Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, Москва