Вы здесь

Главная

Подавление экспрессии генов, опосредованное эндогенной двуцепочечной РНК

ID_Статьи: 
94.00

Метод специфического подавления экспрессии генов при помощи гомологичной двухцепочечной РНК (дцРНК) широко используется в современной функциональной геномике. В то же время, механизм действия дцРНК остается плохо изученным. Ранее было показано, что регуляции посредством дцРНК подвержены семенникспецифические гены Stellate Drosophila melanogaster, гиперэкспрессия которых приводит к стерильности самцов. Транскрипция комплементарных цепей РНК с высокогомологичных Stellate повторов Su(Ste) приводит к появлению в сперматоцитах дцРНК. ДцРНК имеет в этом случае эндогенное происхождение в отличии от других случаев подавления генной экспрессии, индуцированных искусственно синтезированной дцРНК.

Задачи исследования состояли в выявлении отдельных этапов функционирования дцРНК в клетках семенников и поиске генов, контролирующих эти стадии. Методом нозерн-гибридизации было показано, что дцРНК Su(Ste) подвергается процессингу с образованием коротких РНК, длина которых составляет 25-27 нк. Оказалось, что для функционирования коротких РНК необходимы гены, кодирующие DEAD-box РНК-хеликазу и белок семейства Argonaute.

Другой задачей исследований было определить, на каком уровне происходит подавление экспрессии генов Stellate: в результате деградации мРНК или в результате снижения транскрипции. Для этого использовали репортерные конструкции, вводимые в геном дрозофилы. Конструкция с промотором тош Stellate регулируется повторами Su(Ste). Однако для инициации транскрипции с этого промотора необходимо присутствие 30 п.н. из 5" транскрибируемой нетранслируемой области (5"-UTR). Экспрессия аналогичной конструкции с заменой 3-х п.н. в районе UTR не снижается, однако практически не зависит от присутствия повторов Su(Ste). Таким образом, для регуляции генов Stellate необходима гомология в транскрибируемой области с дцРНК Su(Ste). Было показано, что регуляция экспрессии генов Stellate может осуществляться в отсуствии собственного промотора этого гена - если его транскрипция направляется гетерологичным промотором.

 

Кленов М.С.1,2, Вагин В.В.2, Аравин А.А.2

1Московский Государственный Университет им. М.В.Ломоносова, Москва (Россия)

2Институт Молекулярной Генетики РАН, Москва (Россия)