Вы здесь

Главная

Особенности взаимодействия интегразы ВИЧ-1 с ДНК-субстратом

ID_Статьи: 
77.00

Одним из важнейших ферментов, необходимых для репликации вируса иммунодефицита человека, является интеграза. Данный белок способен взаимодействовать с концевыми U3 и U5 областями вирусной ДНК, катализируя последовательное отщепление концевых динуклеотидов 5'-GT-3' (реакция З'-концевого процессинга) и встраивание укороченной ДНК в геном зараженной клетки. Интеграза не имеет клеточных аналогов и потому является удобной мишенью для высоко селективного подавления вирусной экспрессии. И, тем не менее, вплоть до настоящего времени принципы функционирования этого фермента остаются достаточно слабо изученными.

Для выяснения механизма взаимодействия интегразы с ДНК использовались как природные, так и химически модифицированные аналоги субстрата, участка U5 вирусной ДНК, а также дуплексы произвольной последовательности, имитирующие клеточную ДНК. Показано, что интеграза обладает одинаковым сродством к любой двуспиральной ДНК независимо от ее нуклеотидной последовательности. Введение в природный углеводо-фосфатный остов модификаций, приводящих к локальной дестабилизации структуры двойной спирали В-формы ДНК (2'-амино- или 2'-О-метилнуклеозиды; 1,3-пропандиол), позволило сделать вывод о необходимости конформационной подвижности ДНК вблизи точки процессинга. Кинетические и термодинамические исследования связывания ДНК, а также идущей за ним каталитической стадии позволили определить основные характеристические константы процессов, что помогло сделать заключение о лимитирующей стадии взаимодействия.

Все полученные данные были использованы для построения новой модели взаимодействия интегразы ВИЧ-1 с природным ДНК-субстратом.

 

Смолов М.А.1, Агапкина Ю.Ю.2, Готтих М.Б.1

1Химический факультет МГУ им. М.В.Ломоносова, Москва (Россия)

2Институт проблем химической физики РАН, Черноголовка (Россия)